基因工程技术及其新进展

10.1 基因工程的基本操作步骤

一般的五个步骤：

1. 获取目的基因
2. 目的基因和载体DNA在体外链接
3. 将重组的DNA分子导入宿主细胞
4. 选择、筛选含目的基因的克隆
5. 培养、观察目的基因的表达

10.2 ZFN与TALEN基因编辑原理

在TALEN中，每个氨基酸都识别一个碱基，识别9个碱基需要9个氨基酸，要27个碱基编码
在ZFN中，每个氨基酸识别三个碱基，识别9个碱基需要3个氨基酸，要9个碱基编码

10.3 CRISPR-Cas概述

一种来源细菌获得性免疫的由RNA指导Cas蛋白对靶向基因进行修饰的技术

CRISPR广泛存在于古菌和细菌基因组中，通常由短的高度保守的重复序列组成，重复序列被间隔序列隔开，CRISPR识别间隔序列来与靶基因结合，Cas蛋白由tRNA转运

细菌和古菌通过对入侵的病毒和核酸进行特异性识别，用Cas蛋白进行切割，达到获得性免疫

整个过程：

10.4 CRISPR-Cas的应用

供体DNA分子指外加的质粒